目的觀(guān)察作為綠茶主要活性成分的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸醋（EGCG）對高糖環(huán)境下足細胞增殖和凋亡的作用并探討其機制。方法將足細胞分為9組。組1：正常糖（5．6mmol／L）。組2：正常糖（5．6mmol／L）＋0．1mmol／LH2O2。組3：DMEM高糖（25mmol／L）。組4：20μmol／LEGCG＋DMEM高糖（25mmol／L）。組5：2．0μmol／I，EGCG＋DMEM高糖（25mmol／L）。組6：0．2μmol／LEGCG＋DMEM高糖（25mmol／L）。組7：0．2mmol／L維生素E＋DMEM高糖（25mmol／L）。組8：0．1μmol／L EGCG＋0．1mmol／L維生素E＋DMEM高糖（25mmol／L）。組9：24．4mmol／L甘露醇＋5．6mmol／L葡萄糖。采用溴脫氧核苷尿嘧啶（Brdu）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測細胞增殖，在Hoechst染色共聚焦激光顯微鏡下觀(guān)察不同濃度EGCG作用24h對足細胞凋亡的影響，采用Annexin V-FITC法檢測足細胞凋亡，CM—H2DCFDA熒光探針檢測足細胞內活性氧（ROS）生成。結果①足細胞增殖：與組1比較，組2在刺激24h時(shí)的足細胞增殖的光密度（D）450值無(wú)顯著(zhù)變化（P〉0．05），48和72h時(shí)D。s。值均顯著(zhù)降低（P值均〈0．05）。與組2比較，組7和組8高糖刺激24h時(shí)的D450值顯著(zhù)升高（P值均〈0．05），組4、組5和組6無(wú)顯著(zhù)變化（P值均〉0．05）；組4、組7和組8在刺激48、72h時(shí)的D450值顯著(zhù)升高（P值均〈0．01）。②激光共聚焦顯微鏡下，凋亡細胞表現為較多的核固縮，DNA濃縮并向核膜靠攏，核質(zhì)比減小，以及胞膜皺縮等早期凋亡形態(tài)學(xué)變化。組2、組3的足細胞凋亡較組1增加，組7明顯少于組4、組5，組9較組2無(wú)明顯增加。③不同濃度EGCG作用后，組4、組5、組8的早期凋亡細胞膜聯(lián)蛋白V（＋）PI（-）比例和壞死細胞膜聯(lián)蛋白V（＋）PI（＋）V（＋）比例均顯著(zhù)低于組2（P值均〈o．05）；組4、組8的早期凋亡細胞膜聯(lián)蛋白V（＋）PI（-）比例均顯著(zhù)低于組7（P值均〈0．05）。④與組2比較，組424h時(shí)的ROS顯著(zhù)減少（P〈0．05），但組6無(wú)顯著(zhù)改變（P〉0．05）；與組7比較，組424h時(shí)的ROS顯著(zhù)減少（P〈0．05），6、12h時(shí)無(wú)顯著(zhù)變化（P值均〉0．05）。結論EGCG（20μmol／L）作用72h促進(jìn)高糖環(huán)境下足細胞增殖，EGCG降低高糖刺激下小鼠足細胞凋亡的作用可能是通過(guò)減少足細胞ROS的生成實(shí)現的。
完成機構：上海交通大學(xué)附屬第一人民醫院腎內科,200080
