茶多糖（Tea-polysaccharides，簡(jiǎn)稱(chēng)TPS）是茶葉中具有特殊生物活性的一類(lèi)與蛋白質(zhì)結合在一起的酸性多糖或酸性糖蛋白。藥理研究表明，茶多糖具有顯著(zhù)的降血糖效果和免疫活性，使茶多糖可望成為預防治療糖尿病及心血管疾病，增加免疫功能的天然藥物。近年來(lái)，大多數研究主要以茶葉為原料制得的茶多糖為主，而對茶籽中多糖的研究甚少。本試驗利用微波作為輔助提取手段，采用正交試驗設計的方法，在單因素試驗的基礎上研究了影響茶籽中多糖得率的關(guān)鍵因子微波功率、固液比、時(shí)間、pH，并考慮了微波對茶籽多糖生物活性的影響，用數學(xué)方法對浸提條件進(jìn)行優(yōu)化篩選，希望為茶籽的綜合利用提供科學(xué)依據。
l材料、試劑與儀器
1.1材料
供試材料為茶籽，由四川農業(yè)大學(xué)茶廠(chǎng)采得，105℃恒溫條件下真空干燥6h，粉碎待用。
1.2主要試劑
濃硫酸（GR）、葸酮（AR）、無(wú)水乙醇（AR）、脫氧核糖（生化試劑）、硫代巴比妥酸（生化試劑）、乙二胺四乙酸二鈉（AR）、核黃素（AR）、氮藍四唑（AR）、甲硫氨酸（AR）、H202（GR）、鞣酸（AR）
1.3主要儀器
可見(jiàn)分光光度計723型（上海精密科儀廠(chǎng)）、真空泵（鄭州市杜甫儀器廠(chǎng)）、真空干燥箱（上海頓克儀器科技有限公司）、旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)）、冷凍離心機（上海手術(shù)器械廠(chǎng)）、實(shí)驗專(zhuān)用微波爐（南京杰全微波設備有限公司）、uV一7500紫外，可見(jiàn)分光光度計（上海天美科學(xué)儀器有限公司）
2試驗方法
2.1試驗設計
取茶籽樣品5g，在規定的條件下利用微波輔助提取，浸提時(shí)不斷攪拌，抽濾后測定浸提液中糖含量。茶籽多糖提取條件采用正交試驗L（44）設計方法，試驗因子的水平及編碼見(jiàn)表l，試驗安排及結果見(jiàn)表2。
表1正交試驗條件因素水平
2.2茶籽多糖提取、分離及活性測定
茶籽樣品→粉碎→水浸提或微波輔助提取→過(guò)濾→調pH值6.5左右→55℃下減壓濃縮→4倍95％乙醇沉淀→冷凍離心→沉淀物用雙氧水脫色→（鞣酸）除蛋白→40℃抽真空干燥→TPs，取一定質(zhì)量TPS水溶解，測定二者對羥基自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2―）的清除作用。
3結果與分析
3.1微波輔助提取正交試驗的結果
試驗安排及結果列于表2，通過(guò)對微功率、固液比、浸提pH、浸提時(shí)間的綜合評價(jià)可知：在試驗條件限定的范圍內，由表中極差大小可以看出，對浸出率影響的主次順序為A>C>B>D。
表2試驗設計及結果
表3試驗設計方差分析
上述結果表明：在試驗條件限定的范圍內，功率對茶籽多糖的提取結果影響最大，增加浸提功率有利于茶籽多糖的浸出；其次是pH和固液比，浸提時(shí)間影響最小。表3正交設計方差分析表明：、浸提功率、pH對茶籽多糖浸出率的影響都達到極顯著(zhù)水平，固液比對茶籽多糖浸出率的影響達到顯著(zhù)水平，而浸提時(shí)間對茶籽多糖浸出率的影響不顯著(zhù)。根據表2中K值的大小，可以估計浸提率最高的水平組合為A4B4C1D3。根據表4各因素不同水平均值多重比較（SSR）可知：功率在達到400W時(shí)，再增加功率對茶籽多糖的浸出率提高已無(wú)顯著(zhù)效果；隨著(zhù)固液比水平的增加，茶籽多糖的浸出率無(wú)極顯著(zhù)提高，只是在固液比為1：20和1：50之間存在顯著(zhù)差別，而在固液比1：30、1：40和1：50之間已無(wú)顯著(zhù)差別，因此固液比設為1：30較為合適；隨著(zhù)pH的增加，茶籽多糖的浸出率表現為先增加后降低再增加的變化趨勢，其中pH為5或8與pH為6或7之間存在顯著(zhù)差異，但從茶籽多糖顯酸性為保護茶籽多糖活性考慮，pH設為5較合適；浸提時(shí)間對茶籽多糖的浸出率提高無(wú)顯著(zhù)效果。據此可以判斷出最佳的提取工藝為A2B2C1D1。
表4各因素水平均值多重比較（SSR）
圖1微波輔助提取對茶籽多糖活性的影響
4討論
微波輔助提取的正交試驗結果分析表明在試驗條件限定的范圍內，對浸出率影響的主次順序為功率>pH>固液比>浸提時(shí)間。其中方差分析表明：功率、pH對茶籽多糖浸出率的影響都達到極顯著(zhù)水平，固液比對茶籽多糖浸出率的影響達到顯著(zhù)水平，而浸提時(shí)間對茶籽多糖浸出率的影響不顯著(zhù)。其中在試驗范圍內，功率在達到400W時(shí)，再增加功率對茶籽多糖的浸出率提高已無(wú)顯著(zhù)效果，而浸提時(shí)間的延長(cháng)對茶籽多糖的浸出率提高無(wú)顯著(zhù)效果。這從側面說(shuō)明微波輔助提取具有高效、低能耗的特點(diǎn)，在保證一定功率的條件下，很短時(shí)間內就能達到浸提的平衡終點(diǎn)。根據各因素不同水平均值多重比較（SSR）結合茶籽多糖的活性，可以確定方案：浸提功~400W、固液比1：30、pH為5、浸提時(shí)間30s最合適。微波輔助提取對茶籽多糖清除·OH的能力影響不顯著(zhù)，而對茶籽多糖清除O2―。的能力有較好的增強作用，其原因是微波輔助提取茶籽多糖能夠縮短浸提時(shí)間，而避免了茶籽多糖在水中長(cháng)時(shí)間受熱，從而使得茶籽多糖清除O2―的能力增強。
