根據茶樹(shù)α-微管蛋白(α-tubulin)的mRNA全長(cháng)序列(GenBank登錄號DQ340766)設計引物,以RT-PCR方法擴增茶樹(shù)α-tubulin基因,將擴增產(chǎn)物克隆到原核表達載體pET-32a(+)上,并轉化至大腸桿菌BL21trxB(DE3)中,經(jīng)異丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)誘導后以包涵體形式表達。以純化后的α-tubulin融合蛋白制備兔多克隆抗體,用Westernblot方法檢測抗體特異性。結果顯示α-tubulin蛋白以包涵體形式大量表達,以融合蛋白制備的抗體對茶樹(shù)體內的α-tubulin具有良好的特異性。
完成機構:安徽農業(yè)大學(xué)茶葉生物化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗室,安徽合肥230036