以湘林1號(hào)和湘林4號(hào)油茶優(yōu)良無性系近成熟種子為材料。采用裂解法和改良的CTAB法提取總RAN;用磁珠法分離得到純化的mRNA;在反轉(zhuǎn)錄酶和其他酶的作用下合成一鏈cDNA和二鏈cDNA;經(jīng)與質(zhì)料載體重組和轉(zhuǎn)化大腸桿菌。成功地構(gòu)建了世界上第一個(gè)油茶種子cDNA文庫(kù).經(jīng)檢測(cè),文庫(kù)存容量達(dá)10^6組率為88.21%.測(cè)序結(jié)果表明:克隆片段長(zhǎng)度一般都大于600bp。說明構(gòu)建的文庫(kù)質(zhì)量較高,能夠滿足ESTs文庫(kù)構(gòu)建及從文庫(kù)中分離篩選重要基因等研究工作的需要.為進(jìn)一步研究奠定了.很好的物質(zhì)和技術(shù)基礎(chǔ).
完成機(jī)構(gòu):[1]中南林學(xué)院經(jīng)濟(jì)林育種與栽培國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南株洲412006 [2]河南職業(yè)技術(shù)師范學(xué)院。河南新鄉(xiāng)453003