茶樹(shù)是一種集硒能力較強(qiáng)的植物，它能將無(wú)機(jī)態(tài)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)態(tài)硒而易于人體的吸收。因此，茶葉是理想的補(bǔ)硒飲品，而對(duì)茶葉中硒含量的測(cè)定是補(bǔ)硒研究最基本的任務(wù)。硒易于揮發(fā)而損失，常規(guī)的濕法消解由于溫度不易控制及加熱時(shí)間較長(zhǎng)而易造成硒損失與樣品和環(huán)境污染。自從1975年文獻(xiàn)中報(bào)道微波濕法消解樣品以來(lái)，微波溶樣技術(shù)得到了較大的發(fā)展。微波消化樣品的方法具有快速、準(zhǔn)確、省試劑、省費(fèi)用、污染少、待測(cè)元素不易損失等特點(diǎn)。筆者采用微波消解分子熒光法測(cè)定茶葉中的硒含量，主要探討微波法消解茶葉樣品時(shí)，微波消解試劑、消解功率、時(shí)間等因素對(duì)硒測(cè)定的影響，以?xún)?yōu)化微波法消解條件。鑒于消解樣品茶葉的特殊性，結(jié)合茶葉微波消解條件，對(duì)基于硒（IV）與DAN（2，3-二氨基萘）生成具有強(qiáng)熒光特性的4，5-苯并苤硒腦的分子熒光光度法測(cè)定硒含量相關(guān)的DAN用量、萃取劑用量等測(cè)定條件進(jìn)行了優(yōu)化。
1材料與方法
1.1材料茶葉樣品為陜西省紫陽(yáng)縣紫健牌紫陽(yáng)綠茶（陜西省紫陽(yáng)縣紫健富硒茶廠(chǎng)生產(chǎn)）。硒粉（光譜純，天津科密歐科技有限公司生產(chǎn)）；2，3一二氨基萘（AJohsonMattheyCompa-ny，NewJersey.USA）。EDTA、鹽酸羥胺、濃硝酸、高氯酸、濃鹽酸、環(huán)己烷、甲酚紅指示劑及其他試劑至少為分析純，未經(jīng)純化直接使用，試驗(yàn)用水均為二次蒸餾水。主要儀器有LWMC一205可調(diào)功率微波化學(xué)反應(yīng)器（南京陵江科技開(kāi)發(fā)有限公司），RF一5301型熒光光度計(jì)（日本島津）。
1.2方法
1.2.1儲(chǔ)備液的配制。100.0ug／ml硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，0.1％2，3二氨基萘（DAN）溶液，EDTA一鹽酸羥胺混合液：參照GB／T5009.93-2003中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)--食品中硒的測(cè)定方法》中“8.1、8.2、8.5”配制。1.0g／ml硒標(biāo)準(zhǔn)使用液：移取一定量硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用0.1mol／LHC1稀釋?zhuān)诒鋬?nèi)保存。
1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制。
分別準(zhǔn)確移取1.0g／ml硒標(biāo)準(zhǔn)液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml于250ml錐形瓶中，各加20.0mlEDTA一鹽酸羥胺混合溶液，加入5.0mlDAN溶液，用鹽酸一氨水緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值1.5～2.0，溶液呈淡紅橙色，在沸水浴中加熱反應(yīng)5min，取出立即冷卻，然后分別用6.0ml環(huán)己烷萃取，振搖5min，將全部溶液移入分液漏斗，靜置分層后棄去水層，環(huán)己烷萃取層從漏斗上口轉(zhuǎn)入帶蓋的比色管中待用。萃取液用1cm比色皿，在RF一5301型熒光光度計(jì)上進(jìn)行熒光強(qiáng)度的測(cè)定。熒光光度計(jì)選擇高靈敏度，狹縫寬度3BITI，激發(fā)波長(zhǎng)377nm，發(fā)射波長(zhǎng)519nlFl，由測(cè)得的熒光值與se濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。
1.2.3樣品消解及分析。
取80.0g茶葉樣品于坩堝中，在60℃下烘2h，將烘好的樣品粉碎后用100目分樣篩分樣。準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5g處理好的樣品于微波化學(xué)反應(yīng)器的容器中，先用5.0ml5.0％硫酸潤(rùn)濕，再加入濃硝酸一高氯酸（4：1）混合酸10.0rnJ，放入微波反應(yīng)器中消解，微波功率0.20kW時(shí)消解30min，當(dāng)伴有白煙，且溶液淡黃色、無(wú)殘?jiān)鼤r(shí)取出，然后沸水浴加熱15min，除去殘余的氮氧化物，取下冷卻，加入10.0ml鹽酸（1：9）混勻，繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o(wú)色并伴有白煙出現(xiàn)，此時(shí)se6+還原為se4+。將此消解液同標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制方法和條件測(cè)定其熒光強(qiáng)度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得硒濃度值，計(jì)算其相應(yīng)含量。
2結(jié)果與分析
2.1微波消解試劑的選擇硒的測(cè)定中，樣品消解試劑一般選擇硝酸一高氯酸混酸體系，由于微波消解不同于濕法消解，有必要對(duì)混酸比例進(jìn)行選擇。取0.5g篩分好的茶葉樣品5份于消解容器中，分別用5.0ml5.0％硫酸潤(rùn)濕，向每份樣品中加入HNO：HCIO體積比為2：1、3：1、4：1、5：1、6：1的混合酸共10.0Inl，在微波功率為0.10kW時(shí)消解樣品，以溶液無(wú)殘?jiān)?、淡黃色作為消化終點(diǎn)，然后按“1.2.3”步驟操作，用“1.2.2”方法測(cè)定試液的熒光強(qiáng)度，測(cè)定結(jié)果如表1所示。由表1可見(jiàn)，混酸比例HNO：HCIO在5：1-6：l時(shí)測(cè)定結(jié)果偏低，說(shuō)明消解不完全；而在2：1-4：1時(shí)，測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異。本著HCIO少用的原則，選用混酸比例HNO：HCIO為4：1。
表1消解試劑對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
2.2微波消解功率、時(shí)間的確定取0.5g篩分好的茶葉樣品5份，分別用5.0ml5.O％硫酸潤(rùn)濕，向每份樣品中加入4：1的HNO：HCIO混酸10.0ml，將每個(gè)樣品分別在微波功率0.1O、O.15、0.20、0.25、0.30kW時(shí)消解，以溶液無(wú)殘?jiān)?、淡黃色作為消化終點(diǎn)，觀(guān)察記錄達(dá)到終點(diǎn)所需的時(shí)間，然后同“2.1”的方法，測(cè)定各試液的熒光強(qiáng)度（表2）。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著功率增大，消解時(shí)間減短，但當(dāng)功率達(dá)0.25kW時(shí)，試液熒光強(qiáng)度明顯減小?？赡苁且?yàn)槲⒉üβ蔬^(guò)高時(shí)，因溫度較高造成樣品中硒的揮發(fā)損失。綜合考慮功率、時(shí)間因素，該試驗(yàn)選擇0.20kW消解30min。
表2微波條件對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
2.3絡(luò)合劑DAN溶液用量的優(yōu)化鑒于消解樣品茶葉的特殊性，基于國(guó)標(biāo)測(cè)定方法，筆者對(duì)DAN溶液（0.1％）的加入量進(jìn)行了優(yōu)化。方法是：于7個(gè)250rrd錐形瓶中各加入1.0~g／ml硒標(biāo)準(zhǔn)使用液1.0rnl，再加入20.0mlEDTA一鹽酸羥胺混合液，用鹽酸和氨水緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值1.5～2.0，分別加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml0.1％DAN溶液，沸水浴中加熱5min，用10.0rnl環(huán)己烷萃取后，測(cè)定各萃取液的熒光強(qiáng)度，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，當(dāng)DAN加入量達(dá)到4.0ml時(shí)，熒光強(qiáng)度趨于穩(wěn)定，確定5.0rnl為DAN最佳用量。
圖1DAN對(duì)熒光強(qiáng)度的影響
2.4環(huán)己烷萃取劑用量的優(yōu)化試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，環(huán)己烷用量不足，萃取不完全，熒光值較??；環(huán)己烷用量過(guò)大，被萃取物濃度降低，亦導(dǎo)致熒光值下降。因此，筆者對(duì)萃取劑甩量進(jìn)行了優(yōu)化試驗(yàn)。取1.0ml硒標(biāo)準(zhǔn)使用液1.0ml于6個(gè)250ml錐形瓶中，加入20.0mlEDTA一鹽酸羥胺混合溶液，緩沖溶液調(diào)節(jié)pH值1.5～2.0，加入0.1％DAN溶液5.0ml，沸水浴中加熱5min，分別用2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0ml環(huán)己烷萃取反應(yīng)物，測(cè)定各溶液的熒光強(qiáng)度。由圖2所示的試驗(yàn)結(jié)果，確定環(huán)己烷的最佳用量為6.0rnl。
圖2環(huán)己烷用量對(duì)熒光強(qiáng)度的影響
2.5共存離子的影響研究表明，銅、鐵、鉬等重金屬離子及大量氧化物對(duì)測(cè)定硒有干擾，可用EDTA.鹽酸羥胺消除。由于茶葉中的有關(guān)干擾離子含量和種類(lèi)具有差異性，為此，
針對(duì)紫陽(yáng)富硒茶，選擇Cu2+、Hg2+、zn2+、Fe3+、Bi3+、Cd2+等離子，按“1.2.2”的試驗(yàn)方法進(jìn)行干擾試驗(yàn)。結(jié)果表明，測(cè)定1.0ug硒，加入20.0ml0.2％EDTA一鹽酸羥胺混合溶液，zn2+、Fe3+、Bi3+、Cd2+在300倍時(shí)不干擾測(cè)定，Cu2+、Hg2+對(duì)硒的測(cè)定有一定干擾，Cu2+的允許量為200倍，Hg2+的允許量為150倍。
2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差按“1.2.2”標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制方法，以1.0Ixg／ml硒標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。由圖3可見(jiàn)，硒含量在1.0-7.0ug時(shí)線(xiàn)性良好，回歸方程y=91.761x，相關(guān)系數(shù)R=0.9909。對(duì)1.0ug／ml硒標(biāo)樣進(jìn)行了6次平行試驗(yàn)，其標(biāo)準(zhǔn)偏差2.755，RSD值為2.5％。
2.7樣品中硒含量的測(cè)定及加標(biāo)回收率試驗(yàn)用“1.2.3”的試驗(yàn)方法微波消解茶葉樣品，測(cè)定紫陽(yáng)富硒茶樣品中的硒含量，同時(shí)做加標(biāo)回收率試驗(yàn)，并以濕法消解（GB／T5009.93-2003）作對(duì)照試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。兩種消解方法測(cè)定樣品結(jié)果的相對(duì)誤差為4.21％。
表3樣品分析結(jié)果3結(jié)論
（1）采用微波化學(xué)反應(yīng)器消解茶葉樣品的消解條件：0.5g樣品加5.0InI5.0％硫酸潤(rùn)濕，加入HNO：HCIO（4：1）10.0ml，在0.20kW時(shí)消解30min。經(jīng)與濕法消解對(duì)照。樣品測(cè)定結(jié)果可靠，回收率高。該方法用于茶葉中硒的消化，省時(shí)、省力、污染小。
（2）應(yīng)用分子熒光光度法測(cè)定紫陽(yáng)富硒茶中微量硒含量，并對(duì)相關(guān)影響因素進(jìn)行了優(yōu)化。確定最佳測(cè)定條件為：pH值1.5～2.0，EDTA一鹽酸羥胺混合液用量20.0rnl，0.1％DAN加入量5.0rI1l，沸水浴加熱5min，6.0ml環(huán)己烷萃取，于激發(fā)波長(zhǎng)377nm、發(fā)射波長(zhǎng)519Nm測(cè)定熒光強(qiáng)度，效果較好。此外，該測(cè)定方法還可用于食品及其他產(chǎn)品中硒含量的測(cè)定。
